通用設(shè)備
專用設(shè)備
檢測分析設(shè)備
醫(yī)療器械I/II類
辦公及電子產(chǎn)品
室驗(yàn)用試劑耗材
工業(yè)生產(chǎn)原材料010-51282213
北京賽百奧科技有限公司
北京市海淀區(qū)亮甲店130號華玉大廈505室
989203@qq.com
Lonza重組C因子法內(nèi)毒素檢測解決方案
近日，受國家政策變動影響，內(nèi)毒素檢測試劑所用原料鱟（中國鱟及圓尾鱟）被列為國家二級保護(hù)動物（國家林業(yè)和草原局、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2021年2月25日公告（2021年第3號）），意味著內(nèi)毒素檢測試劑原料將受到嚴(yán)格管控，鱟試劑生產(chǎn)廠家宣稱將停止供應(yīng)以下產(chǎn)品：
1、單支凝膠法鱟試劑 (0.1mL) - 靈敏度0.5、0.25、0.125、0.06 EU/mL將于今年 6月30日停產(chǎn)；
2、四次裝凝膠法鱟試劑 (0.5mL) - 靈敏度0.25、0.125EU/mL將于今年 12月31日停產(chǎn)。
根據(jù)公告以及LAL廠家的官宣，國內(nèi)藥品、醫(yī)療器械放行將面臨困境，藥企、醫(yī)療器械企業(yè)須盡早選擇其他替代測試方法。目前藥典收錄方法都是以鱟試劑為基礎(chǔ)制定，新方法只能寄希望于找到LAL替代方法。
LAL替代品研究進(jìn)展
說到尋找鱟試劑（LAL試劑）的替代品，這其實(shí)在國內(nèi)外一直是個(gè)熱點(diǎn)話題。內(nèi)毒素的控制在醫(yī)療、藥品的研究中應(yīng)用非常廣泛，傳統(tǒng)的鱟試劑法中涉及使用到遠(yuǎn)古生物鱟血液中的變形細(xì)胞，由于生態(tài)環(huán)境的惡化，鱟數(shù)量大規(guī)模減少，相關(guān)研究人員不斷地研究開發(fā)內(nèi)毒素的新方法以應(yīng)對不同的檢測需求。
鱟采血現(xiàn)場
圖片來源：Timothy Fadek/Corbis/Getty
磁彈性傳感器測定法：該方法使用應(yīng)激反應(yīng)磁彈性傳感器，監(jiān)測 LAL測定的凝膠形成（黏度變化）進(jìn)而測定內(nèi)毒素的總量[1]。在與不同內(nèi)毒素濃度的測試樣品混合后，將帶狀磁彈性傳感器（12.7mm×6mm×28μm）浸入LAL 測定中，并記錄傳感器的共振幅度隨時(shí)間的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明內(nèi)毒素濃度與最大凝血率之間存在極好的相關(guān)性。磁彈性傳感器的技術(shù)可以在需要大約 20 min 的測試中檢測到0.0105EU/mL的內(nèi)毒素。與用于確定內(nèi)毒素濃度的光學(xué)方法不同，測試溶液的顏色不影響磁彈性傳感器測量。由于傳感器讀取器電子器件的尺寸小且成本低，基于磁彈性傳感器的內(nèi)毒素檢測系統(tǒng)非常適合廣泛用于內(nèi)毒素的測定。該方法按照原理可適用于所有采用 LAL 法測定的放射性藥品中。
生物傳感器：以鱟試劑的替代品為核心的研究，包括大量生物傳感器的研究[2]。針對細(xì)菌內(nèi)毒素快速、實(shí)時(shí)、靈敏的檢測，生物傳感器法是未來內(nèi)毒素檢測發(fā)展趨勢之一。內(nèi)毒素表面能夠通過靜電和疏水性物質(zhì)與適當(dāng)修飾的表面相互作用，通過磷酸基團(tuán)的配位，或更有選擇性地與識別的蛋白質(zhì)或適體結(jié)合。根據(jù)這個(gè)原理相關(guān)的生物傳感器可以分為蛋白類、肽類、抗體類、適體類、細(xì)胞類等，而這些檢測方法中，重組C因子法無疑是比較流行的一種方法。
近年來，重組C因子法也是使用由圓尾鱟或東方鱟的基因克隆而制成的重組C 因子與內(nèi)毒素反應(yīng)，以終點(diǎn)法定量測定熒光底物的單步酶促反應(yīng)裂解產(chǎn)物來量化細(xì)菌內(nèi)毒素的一種方法[3]。國內(nèi)已有相關(guān)的研究報(bào)道[4]。歐洲藥典委員會
分化抗原簇蛋白 14（CD14）[5]、Toll 樣受體4（TLR4）和髓樣分化蛋白-2（MD-2）[6]、刀豆素A[7]、重組的抗鱟LPS因子[8-10]、CramoLL lectin[11]等蛋白應(yīng)用于內(nèi)毒素的檢測也取得了一定的成果，其中TLR4和MD-2為識別傳感器的電化學(xué)檢測方法可以檢測到0.000 5～5EU/mL的內(nèi)毒素，刀豆素A 為識別傳感器的光學(xué)檢測方法檢測內(nèi)毒素的范圍在0.2～20 μg/mL。重組的抗鱟LPS因子為識別蛋白，檢測靈敏度可達(dá)100pg/mL。
lonza重組表達(dá)的C因子內(nèi)毒素檢測方法
成熟的重組C因子法內(nèi)毒素檢測技術(shù)：
Lonza PyroGeneTM重組C因子試劑盒是內(nèi)毒素檢測方法的發(fā)展成果。通過體外重組鱟凝血級聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)組分：C因子，重組C因子法只需一部反應(yīng)，優(yōu)于傳統(tǒng)LAL法且不依賴動物源成分-鱟血。
PyroGeneTM重組C因子法，激活的C因子直接剪切一個(gè)熒光底物，產(chǎn)生的信號被熒光酶標(biāo)儀識別。由于熒光信號的動態(tài)范圍大，相較于傳統(tǒng)的動態(tài)LAL法，PyroGeneTM重組C因子法只需一步反應(yīng)，檢測范圍即可達(dá)到5.0EU/ml–0.005EU/ml。
上圖分別展示了PyroGeneTM重組C因子與傳統(tǒng)LAL法，如動態(tài)顯色法和動態(tài)濁度法的激酶級聯(lián)反應(yīng)。
合規(guī)審批歷史
2012年6月，F(xiàn)DA將重組C因子法納入可替代方法；
2015年7月，歐洲藥典將重組C因子法納入可替代方法；
2018年9月，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了首個(gè)以重組C因子檢測內(nèi)毒素的單抗藥；
2018年12月，歐洲藥典征求意見稿將重組C因子納入歐洲藥典；
2019年1月，中國藥典征求意見稿將重組C因子納入2020版中國藥典- 2020版藥典已納入，作為可替代方案；
2019年12月，歐洲藥典將重組C因子納入到新一版的歐洲藥典中，預(yù)計(jì)2021年生效。
* 依據(jù)美國藥典(USP) <1225>和人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會議（ICH）Q2B，重組C因子法只是被視為“替代檢測方法”。這意味著監(jiān)管機(jī)構(gòu)只會認(rèn)可做過驗(yàn)證研究的重組C因子檢測結(jié)果，并且必須對使用該方法檢測的每個(gè)產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證研究。（驗(yàn)證研究通常是用來比較替代方法和藥典方法，驗(yàn)證兩者之間的相關(guān)性。經(jīng)過驗(yàn)證之后，跟進(jìn)藥物或器械的監(jiān)管備案是必要的）。
Lonza rFC 產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 靈敏度 EU/mL | 檢測 | 貨號 |
PyroGene? Recombinant Factor C Assay | 0.005 to 5 | 192tests/kit | 50-658U |
PyroGene? Recombinant Factor C Assay | 0.005 to 5 | 2880tests/kit | 50-658NV |
PyroWave? XM Fluorescence Reader | 25-345S | ||
WinKQCL? 6 Software Package | 25-611 |
重組C因子是一種化學(xué)合成的試劑，性狀更穩(wěn)定，均一性相對也更好。試劑價(jià)格目前和鱟試劑相當(dāng)，后期如在國內(nèi)外廣泛應(yīng)用起來，價(jià)格會比鱟試劑更具競爭優(yōu)勢。
產(chǎn)品訂購請點(diǎn)擊：
參考文獻(xiàn)：
[1]:Ong K G, Leland J M, Zeng K, et al. A rapid highly-sensitive endotoxin detection system [J]. Biosens Bioelectron, 2006, 21(12): 2270-2274.
[2]:Su W, Ding X. Methods of Endotoxin Detection [J]. J Lab Autom. 2015, 20(4): 354-364.
[3]: 裴宇盛,蔡彤,高華.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查新方法進(jìn)展 [J].藥物分析雜志, 2014, 34(3): 392-395.
[4]:裴宇盛,蔡彤,陳晨,等.重組 C因子法檢測福沙匹坦二葡甲胺中細(xì)菌內(nèi)毒素的方法學(xué)研究 [J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2019, 36(1): 1-4.
[5]:Burkhardt M, LopezAcosta A, Reiter K, et al. Purification of soluble CD14 fusion proteins and use in an electrochemiluminescent assay for lipopolysaccharide binding [J]. Protein Expression Purif, 2007, 51(1): 96-101
[6]:Yeo T Y, Choi J S, Lee B K, et al. Electrochemical endotoxin sensors based on TLR4/MD-2 complexes immobilized on gold electrodes [J]. Biosens Bioelectron, 2011, 28(1): 139-145.
[7]:Hreniak A, Maruszewski K, Rybka J, et al. A luminescence endotoxin biosensor prepared by the sol-gel method [J]. Opt Mater (Amsterdam, Neth) 2004, 26(2): 141-144.
[8]: Pallarola D, Battaglini F. Surfactant-assisted lipopolysaccharide conjugation employing a cyanopyridinium agent and its application to a competitive assay [J]. Anal Chem, 2009, 81(10): 3824-3829.
[9]:Priano G, Pallarola D, Battaglini F. Endotoxin detection in a competitive electrochemical assay: synthesis of a suitable endotoxin conjugate [J]. Anal Biochem, 2007, 362(1): 108-116.
[10]:Priano G, Battaglini F. Use of an antimicrobial protein for endotoxin detection in a competitive electrochemical assay [J]. Anal Chem, 2005, 77(15): 4976-4984.
[11]:Oliveira M D L, Andrade C A, Correia M T, et al. Impedimetric biosensor based on self-assembled hybrid cystein-gold nanoparticles and CramoLL lectin for bacterial lipopolysaccharide recognition [J]. J Colloid Interface Sci, 2011, 362(1): 194-201.
購物車
微信掃碼
在線客服
售前咨詢 
用戶中心
熱線電話
購物車