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名稱:Quasi Vivo細胞灌流培養(yǎng)系統(tǒng)
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產(chǎn)品簡介:

英國Kirkstall公司創(chuàng)新研發(fā)Quasi Vivo灌流培養(yǎng)系統(tǒng),可為細胞培養(yǎng)提供持久恒定的流動培養(yǎng)環(huán)境,相比傳統(tǒng)靜置培養(yǎng)系統(tǒng),能最大限度模擬體內(nèi)環(huán)境,促進細胞生長和分化。

品牌:英國Kirkstall

產(chǎn)品說明:
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Quasi Vivo細胞灌流培養(yǎng)系統(tǒng)

 

英國Kirkstall公司創(chuàng)新研發(fā)Quasi Vivo灌流培養(yǎng)系統(tǒng),可為細胞培養(yǎng)提供持久恒定的流動培養(yǎng)環(huán)境,相比傳統(tǒng)靜置培養(yǎng)系統(tǒng),能最大限度模擬體內(nèi)環(huán)境,促進細胞生長和分化。

 

視頻介紹:

 

 

 

顛覆傳統(tǒng)細胞培養(yǎng)方式,Quasi Vivo灌流培養(yǎng)系統(tǒng)

 

灌流培養(yǎng)

呼吸道上皮細胞的氣液界面培養(yǎng)是研究經(jīng)空氣傳播的病原體,如SARS等的常用的模型。傳統(tǒng)的培養(yǎng)方式是用TransWell在普通培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。但是此種培養(yǎng)方式無法模擬培養(yǎng)過程中營養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物在組織內(nèi)的運輸,培養(yǎng)得到的模型通常有各種各樣的缺陷,并且所需實驗周期較長。

 

呼吸道上皮細胞的常規(guī)transwell靜止培養(yǎng)方式

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Quais Vivo(QV600)灌流培養(yǎng)系統(tǒng)(腔室+儲液瓶+底座+管道+泵等)

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而Quasi Vivo灌流培養(yǎng)系統(tǒng)可為細胞培養(yǎng)提供持久恒定的流動培養(yǎng)環(huán)境,最大限度模擬體內(nèi)環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn),使用Quasi Vivo系統(tǒng)進行灌流培養(yǎng)與靜態(tài)培養(yǎng)相比,氣液界面培養(yǎng)的呼吸道上皮細胞(正常人氣管上皮細胞 Normal Human Bronchial Epithelial Cells,簡稱NHBE;小氣道上皮細胞 Small Airway Epithelial Cells,簡稱SAE),發(fā)育分化速度更快,表現(xiàn)為纖毛分化度更高,纖毛運動更強、粘液產(chǎn)生和屏障功能更強。在灌注下加速分化后,將上皮細胞轉(zhuǎn)移到靜態(tài)條件下,并添加抗原呈遞細胞(APC)以研究其在病原體感染后的功能。(Chandorkar P, et al., Fast-track development of an in vitro 3D lung/immune cell model to study Aspergillus infections. Sci Rep. 2017 7(1):11644. doi: 10.1038/s41598-017-11271-4.

 

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01、人體內(nèi)所有的細胞都需要營養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物的流動

 

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02、肺部氣管/支氣管和小氣道上皮結(jié)構(gòu)精細,進行體外培養(yǎng)模擬體內(nèi)環(huán)境,對呼吸道病原體的研究至關(guān)重要

 

 

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03、采用全新的灌流培養(yǎng)方式培養(yǎng)呼吸道上皮細胞(采用QV600)

 

相比使用transwell靜止培養(yǎng)(Static Conditions),Quasi Vivo灌流培養(yǎng)系統(tǒng)(Perfused Conditions)中,呼吸道上皮細胞的生長和分化呈現(xiàn)更好狀態(tài)  

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04、電鏡照片顯示,采用灌流培養(yǎng)方式(Perfused conditions)的呼吸道上皮細胞,分化程度更高

 

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05、使用MUC5B染色可以發(fā)現(xiàn),采用灌流培養(yǎng)方式(Perfused conditions)的呼吸道上皮細胞,在培養(yǎng)的第7天即可分泌大量粘液。用OCCLUDIN染色可以發(fā)現(xiàn),細胞間的緊密連接發(fā)育更完善

 

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06、使用WGA染色發(fā)現(xiàn),采用灌流培養(yǎng)方式(Perfused conditions)的呼吸道上皮細胞,纖毛分化度更高

 

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07、測量TEER(經(jīng)細胞電阻),采用灌流培養(yǎng)方式(Perfused conditions)的呼吸道上皮細胞TEER值更大,代表得到的上皮細胞膜狀結(jié)構(gòu)更完整

 

 

Quasi Vivo全球應(yīng)用

全球使用Kirkstall公司Quasi Vivo灌流培養(yǎng)系統(tǒng)的學(xué)術(shù)及研究機構(gòu)已達70+個,遍布美國、英國、法國、瑞典、奧地利、意大利、荷蘭、瑞士、日本等。目前Quasi Vivo灌流培養(yǎng)系統(tǒng)已成功用于以下器官模型的培養(yǎng):

1. 呼吸系統(tǒng)(培養(yǎng)熱點)

2. 肝臟

3. 腎臟

4. 心血管

5. 成纖維細胞

6. 糖尿病模型

7. 血腦屏障

8. 腦組織類器官

 

 

、不同細胞,Quasi Vivo型號怎么選?

 

01、單一細胞

 

QV500:所有腔室培養(yǎng)相同的細胞。

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02、細胞共培養(yǎng) 

 

QV600每個腔室培養(yǎng)2種或以上細胞。

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QV900使管路上游的細胞培養(yǎng)基成為下游細胞的條件培養(yǎng)基。

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流動培養(yǎng)形成含血管的3D心臟組織 | 再生醫(yī)學(xué)

 

在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,怎樣培養(yǎng)出含血管的組織,是未來應(yīng)用能否成功的關(guān)鍵之一。早期的臨床試驗采用生長因子或細胞注射的方法來修補損傷的心臟,但由于注射細胞造成的炎癥反應(yīng)和局部缺血會在體內(nèi)造成低氧環(huán)境,使得注射的細胞定植率低而死亡率高,不能有效地修復(fù)損傷的心臟功能。

 

Quasi Vivo QV500流動培養(yǎng)系統(tǒng)為接種在明膠支架上的人間充質(zhì)干細胞(hMSCs)和人心肌祖細胞(hCMPC)提供充足的氧氣,促進細胞和營養(yǎng)物質(zhì)向支架核心內(nèi)擴散,并能快速有效地排除組織內(nèi)的代謝廢物,促進血管生成,從而形成由血管樣和心臟樣細胞組成的組織結(jié)構(gòu)密集的適于體內(nèi)移植的原組織。(Pagliari S, et al. A multistep procedure to prepare pre-vascularized cardiac tissue constructs using adult stem cells, dynamic cell cultures, and porous scaffolds. Frontiers in Physiology. 2014; 5: 210)

 

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Quasi-Vivo流動培養(yǎng)系統(tǒng) (QV500型)的蠕動泵將培養(yǎng)基從儲液瓶泵到兩個串聯(lián)的培養(yǎng)腔室內(nèi),并能保持恒定流速(200μl/min),保證多孔明膠支架內(nèi)層的培養(yǎng)基流動。

 

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構(gòu)建含血管的3D心臟的實驗方案示意圖。明膠多孔支架被浸入稀釋的Matrigel中,然后轉(zhuǎn)移至內(nèi)皮分化培養(yǎng)基中。之后將人間充質(zhì)干細胞接種在支架上,使人間充質(zhì)干細胞定植在支架培養(yǎng)上并向內(nèi)皮進行分化,96小時后,將在聚苯乙烯細胞培養(yǎng)板用心臟分化培養(yǎng)基預(yù)先定型2周的心臟TNT-GFP人心肌祖細胞接種于血管化的支架上,用QV500流動培養(yǎng)系統(tǒng)在心臟分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天。

 

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采用上述實驗方案,對用QV500培養(yǎng)一周后的共培養(yǎng)結(jié)構(gòu)進行檢測,發(fā)現(xiàn)在支架上有大量細胞定殖。

 

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QV500流動培養(yǎng)條件下支架內(nèi)部浸潤了大量的血管樣細胞(紅色)和人心肌前體細胞(hCMPC)衍生的心肌細胞(綠色),而靜態(tài)培養(yǎng)條件下,細胞大部分分布在支架表面。

 

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免疫組化結(jié)果顯示通過QV500動態(tài)培養(yǎng)可以促進心肌樣細胞(GFP,綠色)和內(nèi)皮樣細胞(VCAM-1陽性細胞,紅色)向支架內(nèi)部浸潤。

 

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(A) 切片顯示QV500流動培養(yǎng)的內(nèi)皮樣細胞(VCAM-1陽性細胞,紅色)排列成孔狀,形成管狀結(jié)構(gòu),并與心肌樣細胞(GFP,綠色)接觸。(B)QV500流動培養(yǎng)條件下,支架內(nèi)廣泛的細胞分布導(dǎo)致形成密集組裝的多細胞組織,該組織衍生自所用的人間充質(zhì)干細胞(hMSCs)和人心肌前體細胞(hCMPC)。

 

總結(jié):在本文中使用的QV500流動培養(yǎng)系統(tǒng),能增強氧氣與營養(yǎng)物質(zhì)的運輸,進而增強工程化心血管組織的活性和功能。

 

與眾不同的Quasi Vivo流動培養(yǎng)系統(tǒng),讓日、美、英、法、瑞士、瑞典等全球70多個研究機構(gòu)獲得了更強大的細胞培養(yǎng)工具,在包括呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、肝臟、腎臟、腸道、腦組織類器官,以及糖尿病的研究上更進一步。

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流動培養(yǎng)實現(xiàn)血腦屏障三種細胞共培養(yǎng) | 阿爾茨海默病新模型

 

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血腦屏障(blood-brain barrier, BBB)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的生理和病理中都起著重要的作用。血腦屏障功能異常會引起包括阿爾茨海默癥(AD)等許多神經(jīng)退行性疾病。組成血腦屏障的毛細血管內(nèi)皮細胞(capillary endothelial cells)、周細胞(pericytes)以及星形膠質(zhì)細胞(astrocytes)間的復(fù)雜的相互作用使得很難在體內(nèi)確定這三種細胞對神經(jīng)毒性各自的貢獻。

 

 

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而Quasi Vivo流動培養(yǎng)系統(tǒng)可為體外培養(yǎng)這三種細胞提供在不形成屏障的情況下維持細胞間通訊的最佳培養(yǎng)環(huán)境。Quasi Vivo流動培養(yǎng)系統(tǒng)為未來研究不同類型的血腦屏障細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和細胞毒性試驗中的特殊作用提供一個有價值的工具。(Miranda-Azpiazu P, et al. A novel dynamic multicellular co-culture system for studying individual blood-brain barrier cell types in brain diseases and cytotoxicity testing. Sci Rep. 2018; 8(1): 1-10.)

 

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1. 單獨培養(yǎng)的人星形膠質(zhì)細胞(A,GFAP陽性)、周細胞(B,α-actin陽性)、血管內(nèi)皮細胞(C,CD31陽性)以及血管內(nèi)皮細胞形成的緊密連接(DZO1陽性)。

 

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2  Quasi-Vivo QV500培養(yǎng)共享相同的培養(yǎng)基的星形膠質(zhì)細胞、周細胞和血管內(nèi)皮細胞的示意圖(A),R為儲液瓶,P為蠕動泵。連接培養(yǎng)基存儲瓶的一個Quasi-Vivo QV500流動培養(yǎng)系統(tǒng)的細胞培養(yǎng)腔室(B)。

 

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3 Quasi-Vivo QV500流動培養(yǎng)系統(tǒng)建立的能同時培養(yǎng)三種不同細胞的多細胞共培養(yǎng)體系。

 

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4 幾種流動培養(yǎng)方式示意圖:A圖為單獨星形角質(zhì)細胞流動培養(yǎng),B圖為單獨周細胞流動培養(yǎng),C圖為單獨血管內(nèi)皮細胞流動培養(yǎng),D圖為三種細胞組合后一起流動培養(yǎng)。

 

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5 MTT法測細胞活力,與靜態(tài)培養(yǎng)相比,采用Quasi-Vivo QV500流動培養(yǎng)系統(tǒng)對單獨培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞(HBECs)、周細胞(HBVPs)、星形角質(zhì)細胞(HAs)(A)或三種細胞共培養(yǎng)(B)的血管內(nèi)皮細胞的細胞活力有明顯升高。

 

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圖6 用MTT法測細胞活力,與靜態(tài)培養(yǎng)(Static)相比,流動培養(yǎng)(Dynamic)的周細胞(HBVPs)會更早受到Aβ25-35(淀粉樣蛋白β肽的Aβ25-35片段,用于阿爾茨海默病的造模)的毒害。

 

總結(jié):本文中研究者利用Quasi-Vivo QV500流動培養(yǎng)系統(tǒng)建立了三種細胞的共培養(yǎng)。這些細胞不接觸,通過共享培養(yǎng)基實現(xiàn)細胞間的通信,不形成屏障能更好的研究這些細胞類型單獨對不同化合物的響應(yīng)情況。并且研究者還發(fā)現(xiàn)共享相同培養(yǎng)基的星形膠質(zhì)細胞、周細胞和血管內(nèi)皮細胞的最適流速為50 μl/min。


作為創(chuàng)新的細胞培養(yǎng)方法,Quasi Vivo流動培養(yǎng)已經(jīng)全球70余家專業(yè)機構(gòu)使用驗證,獲得了令人側(cè)目的培養(yǎng)效果,在美、英、法、日等多國開展了頗具新意的細胞研究,涉及呼吸系統(tǒng)、肝臟、腎臟、心血管、成纖維細胞、糖尿病模型、腦組織類器官等。


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